江蘇宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

來源：發布時間：2025-08-28

宿主細胞蛋白來源中往往同時存在核酸，胞膜脂類，培養基中的氨基酸等非HCP成分會干擾總蛋白的檢測準確性，需要在檢測之前進行純化前處理，同時對總蛋白檢測方法進行方法學確認。HCP是一種多蛋白質的混合物，總蛋白定量方法之間檢測結果會存在一定程度的差異，這也是導致HCP免疫檢測方法結果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測結果差異較大，一般同時采用2種以上經過確認的方法檢測，再取均值。總蛋白檢測方法的定量限一般只能達到μg/mL水平,但是HCP檢測試劑盒的產品校準品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產品校準品中存在稀釋誤差，需要對產品校準品進行重新標定賦值。

HCP抗體能識別工藝中存在的HCP，避免有占優勢的抗體聚集，尤其關注潛在的高風險性HCP的識別能力。江蘇宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

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針對宿主細胞蛋白殘留檢測，工藝特異型檢測試劑盒（upstream-process）專為特定生產工藝設計，其關鍵在于使用產物的實際宿主細胞進行開發與驗證，模擬真實生產流程獲取廣譜HCP抗原，并要求抗血清具備高度覆蓋率以適應工藝變動，確保對特定生產流程殘留的高度準確監控。平臺型檢測試劑盒（platform）則由生產商針對其特定表達宿主細胞和相近工藝自行開發，其優勢在于可使用相同的參考標準品和試劑統一監測在該宿主上生產的不同產品，適用于上游工藝足夠相似的產品線。通用型檢測試劑盒（commercial）則作為市售廣譜方案，適用于相似宿主細胞的常規檢測，但因其制備過程可能無法完全模擬目標產物的實際生產，必須嚴格評估多克隆抗體對特定產品HCP的覆蓋率，以保證檢測可靠性。三類試劑盒覆蓋從深度定制到通用篩查的不同需求。

廣東工藝特異型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析湖州申科HCP試劑盒開發經抗原表征、抗體制備到體系驗證，全流程符合法規要求。

在宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的分析方法中， ELISA方法是廣泛應用的，并作為QC日常放行檢測的主要手段。ELISA方法相對簡單、精度良好，方便設定控制范圍和建立技術規范，適用于產品開發和過程控制；但ELISA方法檢測依靠抗原抗體特異性結合，因此用存在于生物制品中的HCPs作為免疫原生產出的抗體質量至關重要。無論是商品化ELISA試劑盒，還是自制的多克隆抗體，如果抗體的特異性和適用性不夠高，都有可能帶來HCPs漏檢的風險，從而對生物制品質量安全帶來風險。除此之外，ELISA檢測HCPs使用多克隆抗體，無法針對性的提供高風險HCPs殘留蛋白真實存在情況。

為什么定制化試劑盒是宿主細胞蛋白殘留檢測的優先選擇？原因之一是建立定制化檢測體系，更滿足商業化生產HCP工藝雜質控制要求。在HCP校準品和HCP抗體兩大關鍵試劑組分滿足要求的前提下，定制化方法的建立和優化是基于真實純化中間品和原液樣品進行，通過優化檢測條件，提高對低濃度HCPs的檢測靈敏度，滿足工藝驗證和過程控制要求。在臨床三期，生產工藝需要進行系統驗證，以確保其穩定性和可重復性。定制化HCP ELISA檢測方法能夠更準確地監測生產工藝中HCP的去除效果，為工藝驗證提供有力支持。在過程控制中，通過工藝特異型的HCP ELISA檢測方法，可以實時監測生產過程中的HCP水平，具備更強的生產異常預警能力，及時發現生產風險，確保產品質量的穩定性。

抗體覆蓋率評估分析需要考慮不同方法間存在的差異，以及如何持續改進和評估方法實驗過程的質量控制。

湖州申科生物結合不同宿主實際的生產工藝，通過高質量免疫原和 HCP 多抗的標準化制備流程，獲得高效價、高覆蓋率的抗體，開發了適用于大腸桿菌表達菌 (BL21) 生產工藝、克隆菌堿裂法提取質粒工藝的 SHENTEK®E.coli HCP檢測試劑盒，適用于CHO\MDCK\HEK293\Sf9\VERO\畢赤酵母等不同宿主的 HCP 檢測試劑盒。用于中間品、原液及終產品等的HCP定量監測。為確保 ELISA 對HCP定量檢測的準確性，須對 HCP 抗體覆蓋率進行驗證。湖州申科抗體覆蓋率平臺采用2D Clean-up 試劑盒去除蛋白樣品的干擾物（洗滌劑、鹽、脂質、酚類和核酸等離子污染物），并設置2D 質控標準品進行嚴格質控，同時以陰性抗體為對照平行試驗，以提高結果準確度。

基于HCP的復雜性，檢測中常遇到中間品，尤其是原液樣品無法達到稀釋線性，可能與樣品基質的干擾有關。廣東ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

篩選HCP試劑盒需考慮線性稀釋（一步法尤重）抗基質干擾穩定檢測值、批間一致性、工藝匹配性等因素。江蘇宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

LC-MS/MS 作為一種成熟可靠的蛋白質組分析技術，憑借其超高的分辨率與準確度在生物分析領域占據重要地位。該技術不僅能實現對低含量宿主細胞殘留蛋白（HCP）的定性檢測，還可通過建立專屬蛋白質譜庫準確鑒定 HCP 的具體種類，為深入解析殘留蛋白組成提供關鍵支撐。不過，其應用過程中面臨的關鍵挑戰在于，如何優化 LC-MS 方法以滿足 GMP 規范中對產品放行檢測的嚴格要求。在質譜檢測環節，通過引入表征清晰的內標與外標蛋白，能夠準確分析 HCPs 的整體組成，并有效鑒別其中具有潛在風險的高風險蛋白。這一技術手段不僅為開發產品專屬的 HCP ELISA 檢測方法提供有力數據支持，還能助力工藝優化升級，加速推動生物制品從研發到獲批上市的全流程進程。

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標簽：宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測宿主細胞殘留DNA檢測

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