北京宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

來源：發(fā)布時間：2025-08-25

LC-MS/MS 作為一種成熟可靠的蛋白質組分析技術，憑借其超高的分辨率與準確度在生物分析領域占據(jù)重要地位。該技術不僅能實現(xiàn)對低含量宿主細胞殘留蛋白（HCP）的定性檢測，還可通過建立專屬蛋白質譜庫準確鑒定 HCP 的具體種類，為深入解析殘留蛋白組成提供關鍵支撐。不過，其應用過程中面臨的關鍵挑戰(zhàn)在于，如何優(yōu)化 LC-MS 方法以滿足 GMP 規(guī)范中對產品放行檢測的嚴格要求。在質譜檢測環(huán)節(jié)，通過引入表征清晰的內標與外標蛋白，能夠準確分析 HCPs 的整體組成，并有效鑒別其中具有潛在風險的高風險蛋白。這一技術手段不僅為開發(fā)產品專屬的 HCP ELISA 檢測方法提供有力數(shù)據(jù)支持，還能助力工藝優(yōu)化升級，加速推動生物制品從研發(fā)到獲批上市的全流程進程。

湖州申科可根據(jù)客戶要求，快速定制符合用戶生產工藝的HCP商業(yè)化檢測試劑盒，滿足用戶快速替換的檢測需求。北京宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

大腸埃希氏菌(Escherichia coli，E. coli)又稱大腸桿菌，其作為模式微生物被廣泛應用于生命科學研究中。隨著基因治療產業(yè)的大力發(fā)展，大腸桿菌也被主要應用于質粒DNA（pDNA）的生產。由于質粒樣品的常見提取工藝中往往使用條件劇烈的堿溶液進行細胞裂解和蛋白質變性，使得其中的HCPs與傳統(tǒng)物理破碎法獲得的HCPs有較大的差異，導致其在采用免疫學原理的檢測方法時，殘留檢測結果差別較大。湖州申科生物E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒用于大腸桿菌（又名大腸埃希菌）克隆菌株相關的HCPs檢測，如DH5α、Top10、JM109等。在抗體制備時采用堿裂工藝制備的HCPs免疫動物，獲得專門的抗體。適用于經堿液裂解工藝處理后的宿主細胞蛋白HCPs定量檢測。

宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體制備不同 HCP 試劑盒檢測結果有差異，企業(yè)要評估篩選合適方案。

中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是抗體、重組蛋白、疫苗等生物制品生產中普遍使用的動物細胞表達系統(tǒng)。在使用CHO宿主生產過程中，不可避免的會引入宿主細胞蛋白（HCP）雜質，即使較低殘留水平下，HCPs也會存在免疫原性，降低產品蛋白穩(wěn)定性等的風險。因此需對生物制品中殘留的HCP進行定量分析，以保證純化工藝的一致性和終產品的安全性。SHENTEK^®CHO HCP檢測試劑盒實現(xiàn)關鍵試劑全國產化，采用CHO 細胞（K1&S）補料分批培養(yǎng)工藝制備HCPs 免疫綿羊，獲得專門的抗體，用于CHO細胞系表達的生物制品(單抗，重組蛋白，疫苗等)中宿主細胞蛋白的殘留檢測。本試劑盒操作步驟少、快速、檢測專一性強、性能穩(wěn)定可靠。

磷脂酶B樣蛋白2（Phospholipase B-Like 2，PLBL2/PLBD2），因其強共純化能力、強免疫原性和潛在的酶活性，被認為是CHO HCP的關鍵高風險因子之一。目前行業(yè)建議，需要開發(fā)特定的檢測方法對這些已知蛋白或特定蛋白進行監(jiān)控以更好地把控其潛在風險。SHENTEK^® CHO PLBL-2殘留檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）是湖州申科生物自主研發(fā)的、具有完全自主知識產權的CHO PLBL-2蛋白通用檢測試劑盒。本試劑盒適用于基于CHO表達系統(tǒng)的生物制品中CHO HCP高風險蛋白PLBL-2的定量檢測。本試劑盒操作步驟少，快速，檢測專一性強，性能穩(wěn)定可靠。

不同培養(yǎng)工藝和產物表達影響 HCP 的數(shù)量和生化復雜性。

宿主細胞蛋白殘留檢測抗體覆蓋率評估實驗操作復雜，需要在建立實驗方法階段對關鍵步驟進行充分的驗證，以證明實驗方法的穩(wěn)健性。湖州申科開發(fā)的基于磁珠捕獲的IMBS方法（immunomagnetic beads separation），在開發(fā)過程中對關鍵步驟進行了充分驗證,相關結果經過專業(yè)評審，驗證的內容如下（部分）：①方法優(yōu)化：針對磁珠與抗體的偶聯(lián)比例、洗滌液體積、洗滌次數(shù)、洗脫次數(shù)等關鍵參數(shù)進行優(yōu)化驗證，以保證方法的穩(wěn)健性；②過程質控：二維電泳存在實驗步驟多，時間跨度長，中間步驟難以控制等缺陷，因此在等電聚焦實驗部分設計了熒光標記多肽，可快速判斷等電聚焦效果。在SDS-PAGE電泳的兩側增加40 ng銀染質控，用于銀染顯色的控制；③方法重復性：針對2D分析以及LC-MS分析進行重復性確認，其中2D分析方法重復性可達到80%以上，LC-MS分析方法可到90%以上；④上樣量優(yōu)化：針對2D分析以及LC-MS分析進行上樣量確認，消除上樣量差異對檢測結果帶來的影響；⑤假陽性：排除樣品與陰性抗體之間是否存在非特異性結合，確定IMBS實驗所設定的步驟、參數(shù)是否有假陽性結果存在。

生物制品臨床申報需提交 HCP 抗體覆蓋率數(shù)據(jù)，否則可能面臨監(jiān)管發(fā)補要求。上海通用型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

為確保HCP ELISA檢測產品符合申報要求，湖州申科在試劑盒的全流程開發(fā)方案嚴格按照法規(guī)要求。北京宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

宿主細胞蛋白來源中往往同時存在核酸，胞膜脂類，培養(yǎng)基中的氨基酸等非HCP成分會干擾總蛋白的檢測準確性，需要在檢測之前進行純化前處理，同時對總蛋白檢測方法進行方法學確認。HCP是一種多蛋白質的混合物，總蛋白定量方法之間檢測結果會存在一定程度的差異，這也是導致HCP免疫檢測方法結果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測結果差異較大，一般同時采用2種以上經過確認的方法檢測，再取均值。總蛋白檢測方法的定量限一般只能達到μg/mL水平,但是HCP檢測試劑盒的產品校準品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產品校準品中存在稀釋誤差，需要對產品校準品進行重新標定賦值。

北京宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

標簽：宿主細胞殘留DNA檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

上一篇 江蘇重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

下一篇： 工藝特異型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測高風險蛋白

久久久天天操_国产精品久久久久久久久免费高清_亚洲欧美网站在线观看_亚洲国产精品va在线观看黑人

北京宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

可能感興趣的產品:

可能感興趣的廠家:

可能感興趣的關鍵詞: