研究人員發(fā)現(xiàn)，離體培養(yǎng)48小時(shí)的全層皮膚可保持屏障特性，且能對不同強(qiáng)度的屏障破壞做出反應(yīng)，使用膠帶剝離或4小時(shí)十二烷基硫酸鈉(SLS)處理通過破壞皮膚結(jié)構(gòu)、促進(jìn)炎癥因子IL-6、IL-8的表達(dá)破壞皮膚屏障5]。使用1:1(v:v)乙mi:bing酮混合物對離體皮膚進(jìn)行損傷造模，PPAR-α激動(dòng)劑RFV3可通過增加神經(jīng)酰胺、絲聚蛋白和轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶1的表達(dá)來促進(jìn)離體皮膚的屏障修護(hù)過程[”。離體皮膚模型還被用來評估清潔產(chǎn)品的功效，ZHOU等人通過對沐浴露A和沐浴露B處理的離體皮膚進(jìn)行免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)，與水對照和沐浴露A處理相比，經(jīng)沐浴露B處理的離體皮膚在處理7天后，顆粒層和角質(zhì)層中絲聚蛋白的表達(dá)明顯減少，證明沐浴露B對皮膚屏障具有破壞作用，此外，使用MTT檢測離體皮膚的組織活力也是用來評價(jià)皮膚屏障修護(hù)功效的重要指標(biāo)。防曬指數(shù)測定：依據(jù)ISO 24444標(biāo)準(zhǔn)，檢測SPF/PA值并標(biāo)注于證書主要位置。廣州化妝品測評中心

不同于新興的3D重組皮膚模型、皮膚類organ和器官芯片模型，離體皮膚雖然擁有較為久遠(yuǎn)的發(fā)展歷史，但由于其具有倫理限制、獲取困難、個(gè)體差異等特殊的局限性，在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用并不寬泛。與傳統(tǒng)的細(xì)胞模型相比，離體皮膚不僅可以在分子細(xì)胞水平實(shí)現(xiàn)對待測物的評估，更能在組織水平評估待測物的功效，具有良好的可視化和宣傳效果。已有大量的研究表明，離體皮膚是研究經(jīng)皮給藥、化妝品及原材料功效、藥品和化妝品安全性、刺激性和毒性的有效替代模型，也逐漸被國內(nèi)外藥品和化妝品的原料商、出品方、監(jiān)管機(jī)構(gòu)和消費(fèi)者所認(rèn)可。離體皮膚在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用或?qū)浹a(bǔ)化妝品安全性和功效評價(jià)體系的缺口。然而，目前國內(nèi)外仍缺乏離體皮膚用于化妝品功效評價(jià)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和監(jiān)督管理規(guī)范，未來可通過起草離體皮膚評價(jià)方法的技術(shù)指南、制定離體皮膚用于化妝品功效評價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范、完善化妝品安全監(jiān)管的法律法規(guī)文件，進(jìn)一步提高離體皮膚模型在行業(yè)內(nèi)的認(rèn)可度、擴(kuò)大離體皮膚模型在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用范圍。化妝品毒理學(xué)安全評估實(shí)驗(yàn)室設(shè)置單獨(dú)潔面區(qū)，確保受試者皮膚預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)化，提升測試結(jié)果可靠性。

斑馬魚胚胎因其透明性與體外受精特性，成為化妝品急性毒性檢測的關(guān)鍵工具。依據(jù)OECD TG 236標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)通過將斑馬魚胚胎暴露于不同濃度受試物溶液中，觀察48小時(shí)內(nèi)的發(fā)育異常（如卵凝結(jié)、體節(jié)異常、心包水腫等）并計(jì)算半數(shù)致死濃度（LC50）。例如，某美白精華液在濃度達(dá)31.5μg/mL時(shí)導(dǎo)致50%胚胎死亡，提示其潛在急性毒性風(fēng)險(xiǎn)。該方法較傳統(tǒng)哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)周期縮短90%，成本降低80%，且符合動(dòng)物福利“3R”原則。目前，該方法已納入《化妝品安全評估技術(shù)導(dǎo)則》，被云南貝泰妮、廣州嬌蘭等企業(yè)用于原料篩選，并形成T/HPCIA 004-2022團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)。然而，斑馬魚對不溶性粉體（如散粉）的檢測存在局限性，需結(jié)合細(xì)胞實(shí)驗(yàn)完善評估體系。

斑馬魚作為模式生物，因其與人類基因同源性高達(dá)87%、皮膚結(jié)構(gòu)相似度高等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于化妝品功效評價(jià)領(lǐng)域。該技術(shù)符合國際3R原則（替代、減少、優(yōu)化），尤其適用于出生5天內(nèi)的胚胎檢測，可規(guī)避傳統(tǒng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的倫理爭議。斑馬魚檢測具備高通量、可視化、高效率等優(yōu)勢，單次實(shí)驗(yàn)可處理數(shù)百條胚胎，通過顯微鏡或熒光標(biāo)記實(shí)時(shí)觀測結(jié)果，實(shí)驗(yàn)周期只需3-7天，成本只為傳統(tǒng)方法的1/10。目前，江蘇省特殊化妝品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心等機(jī)構(gòu)已搭建斑馬魚檢測系統(tǒng)，覆蓋保濕、緊致、抗氧化等功效評價(jià)，成為化妝品功效宣稱的重要依據(jù)。抗氧化能力檢測：采用DPPH自由基處理法，量化產(chǎn)品抗自由基活性單位。

目前，化妝品原料過敏性檢測主要依賴動(dòng)物實(shí)驗(yàn)替代方法、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和人體斑貼試驗(yàn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)替代方法：如局部淋巴結(jié)試驗(yàn)（LLNA），通過檢測小鼠耳部淋巴結(jié)中增殖的淋巴細(xì)胞數(shù)量評估致敏性，靈敏度達(dá)80%以上，且減少動(dòng)物痛苦。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：基于角質(zhì)形成細(xì)胞或樹突狀細(xì)胞的體外模型，如KeratinoSens?和h-CLAT試驗(yàn)，通過檢測細(xì)胞因子分泌或表面標(biāo)志物變化預(yù)測致敏潛力。人體斑貼試驗(yàn)：將原料封閉貼敷于受試者背部皮膚，48小時(shí)后觀察反應(yīng)，是驗(yàn)證原料安全性的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但耗時(shí)長、成本高。此外，新興的組學(xué)技術(shù)（如轉(zhuǎn)錄組學(xué)、代謝組學(xué)）正逐步應(yīng)用于致敏機(jī)制研究，為精細(xì)檢測提供新思路。環(huán)特人體功效實(shí)驗(yàn)室專注化妝品第三方檢測，以科學(xué)數(shù)據(jù)賦能產(chǎn)品功效驗(yàn)證。化妝品新原料毒性實(shí)驗(yàn)公司

科學(xué)依據(jù)：檢測報(bào)告需包含體外實(shí)驗(yàn)、人體試驗(yàn)等多元數(shù)據(jù)，支撐產(chǎn)品功效宣稱。廣州化妝品測評中心

什么是拉曼光譜？1928年，印度物理學(xué)家C.V.Raman他們在用汞燈的單色光來照射CCl4液體時(shí)，在液體的散射光中觀測到了頻率低于入射光頻率的新譜線。光照射到物質(zhì)上時(shí)會(huì)發(fā)生彈性散射和非彈性散射。彈性散射的散射光是與激發(fā)光波長相同的成分。非彈性散射的散射光有比激發(fā)光波長長的和短的成分，統(tǒng)稱為拉曼（Raman）效應(yīng)。由于拉曼譜線的數(shù)目，位移的大小，譜線的長度直接與試樣分子振動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)能級有關(guān)。因此，對拉曼光譜的研究，也可以得到有關(guān)分子振動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)的信息。目前拉曼光譜分析技術(shù)已廣泛應(yīng)用于物質(zhì)的鑒定，分子結(jié)構(gòu)的研究譜線特征。廣州化妝品測評中心