外泌體研究的主要應用:外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了一些病癥的生長與侵襲。一些病癥。一些病癥轉移。來自白血病干細胞的外泌體促進急性骨髓性白血病(AML)細胞的增殖、遷移和壓制細胞凋亡。治病靶標。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D,從而特異性高效靶向至胰腺病細胞,以明顯降低RAS活化、病細胞增殖和轉移過程。免疫。β細胞將含有蛋白質和miRNA的外泌體釋放到細胞外,并可轉移到其他代謝部位或免疫內皮細胞,有利于維持葡萄糖體內平衡或造成胰島素抵抗。心血管。外泌體介導miR-155從平滑肌細胞轉移到內皮細胞導致了內皮細胞的損傷促進動脈硬化。分子標記。疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細胞病中發現循環EVs的水平上升由于外泌體的特殊結構和功能,使得它具有潛在的應用價值。開封正規外泌體提取試劑推薦廠家
外泌體研究的主要應用:外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了一些病癥的生長與侵襲。一些病癥。一些病癥轉移。來自白血病干細胞的外泌體促進急性骨髓性白血病(AML)細胞的增殖、遷移和壓制細胞凋亡。治病靶標。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D,從而特異性高效靶向至胰腺病細胞,以明顯降低RAS活化、病細胞增殖和轉移過程。免疫。β細胞將含有蛋白質和miRNA的外泌體釋放到細胞外,并可轉移到其他代謝部位或免疫內皮細胞,有利于維持葡萄糖體內平衡或造成胰島素抵抗。心血管。外泌體介導miR-155從平滑肌細胞轉移到內皮細胞導致了內皮細胞的損傷促進動脈硬化。分子標記。疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細胞病中發現循環EVs的水平上升。預后標志。濟南外泌體提取試劑產品介紹所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。
外泌體的提取方法:1、色譜法。色譜法是利用根據凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關系而對溶質進行分離的分析的方法。樣品中大分子不能進入凝膠孔,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,首先被流動相洗脫出來;小分子可進入凝膠中絕大部分孔洞,在柱中受到更強地滯留,更慢地被洗脫出。分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。2、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質,利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法
外泌體在肺病進程中的作用:肺病細胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進一些病癥的生長。據相關報道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調節基質細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進一些病癥血管的生成;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動脯氨酰羥化酶及壓制緊密結合蛋白ZO-1來促進肺病的生血管作用。此外,有研究發現,外泌體中的內容物可以觸發上皮-間質轉化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加,促使人正常支氣管上皮細胞出現EMT,從而使肺支氣管正常上皮細胞出現增殖,遷移能力。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。外泌體提取:低速離心去除細胞和凋亡碎片。
外泌體的提取、分離方法:梯度密度離心法。研究發現,外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,因此,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結合,原理是先除去非囊泡物質,再通過梯度密度濃縮提取外泌體,該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足,污染物質可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個密度范圍又比較寬。這些試劑盒不需要特殊設備,隨著產品不斷更新換代,提取效率和純化效果逐漸提高。唐山外泌體提取試劑生產廠家
在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程,與多種疾病的發生和進程密切相關。開封正規外泌體提取試劑推薦廠家
外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,多角度進行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結構觀察,即通常為茶托型或一側凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標志物檢測:外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細胞質蛋白,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結合蛋白(Annexins);開封正規外泌體提取試劑推薦廠家