冷凍與解凍過程中涉及多個環節,包括溫度控制、時間控制、冷凍保護劑的添加與去除等。這些環節中的任何一步操作不當都可能導致紡錘體損傷。因此,需要不斷優化冷凍與解凍技術,以減少對紡錘體的不良影響。近年來,研究者們通過不斷嘗試和優化冷凍保護劑的配方,取得了進展。例如,甘油、二甲基亞砜(DMSO)等滲透性保護劑被用于哺乳動物卵母細胞的冷凍保存中,它們能夠迅速降低細胞內水分含量,減少冰晶形成。同時,一些非滲透性保護劑如蔗糖、海藻糖等也被發現對紡錘體具有一定的保護作用。紡錘體在細胞分裂后期通過收縮力推動染色體分離。北京核移植紡錘體改善分級
紡錘體觀測儀使ICSI更加安全可靠
在進行單精子卵胞漿內注射(ICSI)授精時,**初人們觀察人體內成熟的卵母細胞時,通常認為,卵母細胞紡錘**于***極體附近,故傳統的ICSI操作是轉動卵母細胞使其***極**于6點或12點處,然后在3點處注入精子。但是,在大量使用紡錘體觀測儀后發現,***極體并不能很好地預測紡錘體的位置。一項研究提示,在ICSI后,用紡錘體觀測儀觀察紡錘體與***極體的夾角,結果發現小于30°這組卵母細胞的正常受精率更高。極體在卵周隙中的移動,或者紡錘體在胞質中的易位都使兩者的位置關系發生改變,普通光學顯微鏡下ICSI穿刺部位的選擇,可能會損傷紡錘體和(或)造成染色體的異常。通過紡錘體觀測儀,可以精確地對卵母細胞中紡錘體的位置進行定位,從而避免在ICSI過程中損傷紡錘體,使ICSI更加安全可靠。有文獻報道,在進行ICSI時,觀察到“雙折射紡錘體”的成熟卵母細胞的受精率和質量胚胎率***高于未觀察到雙折射紡錘體組。也有學者發現,有些卵母細胞在普通光學顯微鏡下看到是正常的,但在紡錘體觀測儀這個“照妖鏡”下,就能顯出原形,表現為有***極體、但缺乏雙折射的紡錘體,這類卵母細胞ICSI后的受精率和妊娠率極低。 北京成熟卵母細胞紡錘體Hoechst染料顯微鏡下的紡錘體,如同精密的分子機器,引導染色體分離。
紡錘體的完整性決定了染色體分裂的正確性。在有絲分裂前期,中心體被復制形成兩個中心體,并逐漸分離,形成兩個紡錘體。紡錘體的微管從中心體發出,與染色體上的著絲粒(kinetochore)結合。著絲粒是一組復雜的蛋白質結構,可以與微管的末端結合。當纖維束的微管末端與著絲粒結合時,纖維束開始縮短,將染色體拉向兩端,實現染色體的精確分離。這一過程不僅確保了每個新細胞都能獲得正確數量的染色體,還保證了遺傳信息的穩定傳遞。
核移植,又稱體細胞核移植,是一種將體細胞的細胞核移入去核卵母細胞中的技術。這一技術的關鍵在于確保移植后的細胞核能夠在卵母細胞內重新編程,恢復全能性,并引導后續的胚胎發育。自1996年克隆羊“多莉”誕生以來,核移植技術便引起了全球范圍內的關注與研究熱潮。紡錘體是卵母細胞在減數分裂過程中形成的關鍵結構,負責精確分離染色體,確保遺傳信息的正確傳遞。然而,紡錘體對外部環境極為敏感,容易受到冷凍過程中溫度波動、滲透壓變化及冷凍保護劑毒性等因素的影響而發生損傷。因此,紡錘體卵冷凍技術的成功與否,直接關系到核移植后胚胎的發育潛力和質量。紡錘體微管的動態變化是細胞對外界刺激響應的一部分。
在生殖醫學領域,卵母細胞的冷凍保存技術一直是研究的熱點之一。尤其是針對卵母細胞內部高度復雜且精細的紡錘體結構,其冷凍過程中的穩定性與完整性直接關系到解凍后卵母細胞的存活率及發育潛能。紡錘體作為卵母細胞內部的關鍵結構,由微管等高分子物質有序排列而成,具有雙折射性。這種特性使得紡錘體在偏振光下能夠呈現出獨特的形態和特征,從而被Polscope等偏振光顯微鏡捕捉并觀察。雙折射性紡錘體的形態、穩定性和完整性對于卵母細胞的正常減數分裂及胚胎發育至關重要。紡錘體微管的動態變化是細胞分裂過程中引人注目的現象之一。北京成熟卵母細胞紡錘體Hoechst染料
紡錘體微管的聚合與解聚受到多種酶的調控。北京核移植紡錘體改善分級
紡錘體觀測儀在補救ICSI中的應用
我們知道,成熟的卵母細胞排出***極體。IVF加入精子后,精子會穿透層層障礙**終進入卵子,隨著時間的推移,卵子的紡錘體會將染色單體拉向兩極,進而排出第二極體,再往后大約加精后9-16小時,雌雄原核會出現,而原核的出現才是受精的標志。但是對于那些沒有受精的卵子,到了原核出現的時間窗,發現沒有受精時再去補救ICSI,往往錯過了卵子的比較好受精時間,因為沒有受精的卵子會在體外老化,即使受精,胚胎的發育潛能也很低。所以,我們在加精后的4-6小時,通過觀察第二極體的排出來初步判斷是否受精,**的增加了那些受精障礙患者的受精率,也避免了卵子的老化。
當然,偶爾也會出現錯誤補救。文獻報道對IVF受精后的未排出第二極體的卵母細胞進行ICSI補救,實驗組用紡錘體觀測儀觀察并統計紡錘體的數目,82.7%含有一個紡錘體,17.3%含有兩個紡錘體,并對含有一個紡錘體的卵母細胞進行補救ICSI;而對照組并未用紡錘體觀測儀觀察紡錘體,只對未排出第二極體的卵母細胞進行補救ICSI。結果發現,使用紡錘體觀測儀觀察紡錘體的數目能顯著提高正常受精率,降低多原核受精比率。 北京核移植紡錘體改善分級